既然都挑了单克隆了，说明你的转化是成功的。至于为什么提不出质粒，首先，要确定你摇菌之后是否有足够的菌长出来了。然后，再确定你提质粒的步骤是否正确，不知道你是用的试剂盒还是自己配的溶液。最后，你需要确保你所用的试剂是没有问题的，是不是忘加东西了，比如RNA酶或者乙醇什么的。提好质粒后可以用分光光度计测一下浓度，或者跑一下胶，以确认是否提出了质粒。
无外乎于试剂盒不合适，菌液过少，或过多导致裂解不充分。
试剂盒问题比较大，可以其他菌液做个对照，就很清楚了
当然如果是农杆菌的话，那质粒量少是很正常的，不像大肠杆菌质粒那么容易提取出来。
你的试剂盒用了多久？如果时间过久，洗蛋白除杂质的buffer中乙醇会挥发，影响回收率；再有我感觉是你加入溶液B时颠倒混匀过于剧烈，这步对质粒提取量影响很大，加溶液A、B快速混匀震荡都没问题，加B时一定轻轻颠倒混匀，望实验顺利，望采纳，有问题随时交流！
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